奶牛胚胎移植技术要点
供体牛应选择品种优良、生产性能好、遗传性稳定、系谱清楚、体质健壮、繁殖机能正常、无遗传和传染性疾病、年龄在15月龄以上的青年母牛或1-3胎产后60-120天的泌乳母牛。受体牛要选择具有良好繁殖性能和健康状态,体形中上等的母牛,首选是初配牛,移植前具有2个正常的发情周期较好。
2.供体牛超数排卵
在奶牛发情周期的适当时间,施以外源性促性腺激素,使卵巢中比自然情况下有较多的卵泡发育并排卵,这种方法称为超数排卵,简称超排。超数排卵的方法较多,但目前较多采用促卵泡素(FSH)减量注射法进行处理。
3.胚胎采集和检卵
经人工输精后卵子受精形成胚胎,在输精后第7天采集胚胎,具体操作是用两通路或三通路冲卵管通过直肠把握的方法进行冲卵,检卵是在立体显微镜下将胚胎从冲卵液中找出并进行处理。
4.胚胎鉴定分级
移植前正确鉴定胚胎的质量,是移植能否成功的关键之一。根据胚胎形态及发育阶段进行评定或等级分类,一般分为A、B、C、D四级。
A级也叫优秀胚胎:胚胎形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,结构紧凑,色调和透明度适中,无游离的细胞和液泡或很少,变性细胞比例小于10%。
B级也叫良好胚胎:轮廓清晰,分裂球大小基本一致,色调和透明度及细胞密度良好,可见到一些游离的细胞和液泡,变性细胞占10%-30%。
C级一般胚胎:轮廓不清晰,色调变暗,结构较松散,游离的细胞或液泡较多,变性细胞达30%-50%。
D级不良胚胎:有碎片的卵、细胞无组织结构,变性细胞占胚胎大部分,约75%。A、B、C级胚胎为可用胚胎,D级为不可用胚胎。
5.胚胎冷冻保存
鲜胚直接移植效果最好,如需冷冻胚胎主要采用三步平衡法和一步细管法,将胚胎装管后利用程控冷冻仪进行冷冻,冷冻后投入液氮容器进行保存。
6.供、受体牛同期发情
采用鲜胚移植时,供、受体母牛需同期发情。目前较适用的是孕激素埋植法、阴道栓塞法以及前列腺素法。
7.胚胎移植
一般在胚胎发育第七天进行移植。移植部位是黄体发育较好一侧子宫角的上1/2至下1/3,如有可能则越深越好。